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miRNA-Seq服务样品要求

更新时间:2014-07-07 14:19:46点击次数:3657次字号:T|T

1、样品要求(含有small RNA的Total RNA) 

1) 样品纯度:OD 260/280值应在1.9~2.2 之间,RNA 28S:18S≥1.5推荐 RIN≥8;DNA 应该去除干净。 
2) 样品浓度:最低浓度不低于100ng/?l。 
3) 样品总量:每个样品总量不少于6?g。 
4) 样品溶剂:溶解在H20中。 
5) 样品运输: RNA用冻存管保存,并用干冰或液氮运输。 

2、样本准备应该遵循的基本原则 

1) 代表性原则:取样的代表性关系到实验结果是否具有科学意义,因此您应该根据实验目的慎重选择您的取样方案。病变组织样本中应不夹带正常组织,正常组织样本中不能含有病变组织。有条件时,应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致,否则可能会影响实验结果的可信度。 

2) 准确性原则:代表性样本的各种特征数据必须被准确记录,并按要求(低温、迅速)采集、制备、贮存、运输,最终正确地按实验设计进行实验和数据处理。

3) 迅速性原则:样本质量是实验中影响实验结果的最关键因素,因此用于实验的样本,在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速,最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。 

4) 低温原则:所取样本离体后,应尽快置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,并保证在实验前始终处于-70℃以下,以避免RNA的降解。 

3、样本准备方法:

1)样本准备应该遵循的基本原则
1.1 代表性原则 
1.2 准确性原则 
1.3 迅速性原则 
1.4 低温原则 


2)样本准备的方法 
2.1 贴壁细胞 
2.2 悬浮细胞 
2.3 全血 
2.4 血浆 
2.5 动物组织 
2.6 临床组织标本 
2.7 植物组织 


3)样本包装 
3.1 注意事项 


4)样本储存 
4.1 样本冷冻储存 
4.2 RNAlater 
4.3 RNAsecure(Life Technologies) 


5)样本运输 
5.1 干冰运输  
5.2 冰袋(Gel Ice or Ice Pack) 


4、注意事项 

1) 我们不接收未经TRIzol试剂处理的细胞样本。

2) 客户如果提供冻存可复苏的细胞株,应首先验证所用冻存方法用于RNA提取的可靠性,并且在送样时提供详尽的复苏方法,以便确保实验成功。 

3) 关于样品编号及登记单:所有样本均应标明准确的样本编号,同时配有一张样本登记表,写明样本名称、物种、编号、取样日期、样本处理情况等。 

4) 关于提取RNA的得率:处于不同发育阶段以及不同生长条件的样本中所含有的RNA的量是不同的,在某些实验条件下或某些病变部位获得的样本中RNA的量可能与常规相应样本有显著的差异。储存条件以及储存时间也是影响RNA得率的关键因素,一般来说从新鲜的样本中总是能够得到预期的RNA产量,但是没有保存在液氮或-80℃冰箱中的样本是不可靠的。此外,即使是保存在液氮或-80℃冰箱中的样本,如果储存时间过长,RNA产量也会显著降低。因此,实验中细胞样本的需要量只能以本公司的抽提结果为准。 

5) 关于备份:为确保实验的顺利,我们强烈建议您在取样时,应同时备份2~3份,如备份3份,则送给我们两份,如果备份2份,则送样一份,您自己留一份,以防备部分样本降解,重新取材或送样耽误您的时间。即使样本全部合格,备份的样本您还可以用来进行其他方面的实验(如定量验证,蛋白方面,生化方面的实验等)。备份又分为两种,一种为严格备份,即:样本取下后一分为二,这样的两份样本基本上具备同性质。另一种为非严格备份,即生物学重复的样本,这样的备份样本同质性要较前者差。



(编辑:sgfmt)

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