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TaqMan探针法原理
1、聚合 在Taq Man探针的5'和3' 端分别连接一个荧光报告(R)染料和一个淬灭物(Q) 正向引物 探针 反向引物。
2、链置换 当探针完整时,报告染料发射的荧光被淬灭。
3、裂解 在每一次延伸循环中,DNA多聚酶将探针上的报告染料裂。
4、聚合完成 报告染料一旦与淬灭物分离即发出它特有的荧光。
Taqman 原理图解
主要特点
●高效平台:7900HT系统是为支持高通量而构建的,光学系统经优化以适用于384孔板荧光信号的激活和实时检测。
●先进的荧光检测技术:一束激光扫描并激活384个孔的每一个孔里的荧光染料,荧光信号通过光栅分光,经过分离的多色荧光同时到达CCD摄像机,实现多色荧光同时检测。
●自动进样装置:自动化装置可容纳84块384孔板,机械手臂可按一定顺序将待测样品板运送至主机内,配备的条形码阅读器(Bar code reader)可自动识别进入主机的样品板编号。
●有效的SNP检测手段:7900HT系统包括对于已知的单一核苷酸多态性(SNPS)作大规模筛选的软件。
优点
■ 高通量终点法进行snp分型时,7900HT每分钟读一块384孔PCR反应板。
■ 操作简便 只需一步PCR反应,无须进行纯化和预处理,直接上机检测。
■ 结果清晰 软件分析结果界面友好,标出了每个样本的基因型及荧光强度,非常直观。
缺点
■ 每次反应只能做一个snp位点的基因分型。
■ 适合大样本的snp检测,如果样本少成本会提高,因为探针成本较高。
■ 7900HT的高通量需要大量的PCR仪支持。